Diabetologia：介导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出胰脏自身免疫反应到显现出1型式哮喘临床研究腹泻的困难重重率在老年人时期就有很好的描述，多个胰脏自身免疫反应阳性的老年人之前有70%在血清转换后10年内患上哮喘，而随访15年的老年人这一数目减小到84%。相对来说，占临床研究1型式哮喘一半以上的型式1型式哮喘的得病机制还没有取得充分的深入研究。

越来越多的人开始用于分期的系统来定义1型式哮喘的困难重重：母体在显现出多种胰脏自身免疫反应时转入第1之前，显现出血糖极度时转入第2之前，显现出腹泻时转入第3之前。一些多发胰脏自身免疫反应阳性的母体，在1期和2期，困难重重较慢，并转变为得病的1型式哮喘。我们在此之前描述了一小组在首次检测到多种胰脏自身免疫反应取样后至少10年无哮喘的总括慢困难重重者，这小组病患人数少，但特点非常明确。随后，我们发现胰脏自身免疫反应免疫CD8+T细胞膜反应会在困难重重较快的病患之前基本不存有，但在近期得病和近十年存有的哮喘病患之前很容易检测到。这显然表明，与困难重重病患来得，这些病患自身免疫反应会的调节增强。

早期计算出来结论，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量正常，但哮喘病患存有一些机能缺陷，其之前包括对IL-2的反应会潜能减低。此外，哮喘病患之前的振荡CD4+T细胞膜显然对调节总括具抵抗性，展示出为振荡T细胞膜的诱发移向，自然诱发的Treg和体内诱发的抑止Treg，以及免疫反应境况的CD4+T细胞膜之前IL-2反应会移向。本深入研究的目的是描述了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群总括较快困难重重者之前的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以这群人基础上的纵向深入研究，在21岁一般而言发病的病患亲属之前检测1型式哮喘的危险因素。我们在此之前描述了近十年较快困难重重者的特点，他们保持多重胰脏自身免疫反应阳性超过10年，但没有显现出哮喘的临床研究腹泻，慢性或非外阴自身免疫。随后，10名继续保持无哮喘并情愿给予大量血液取样的较快困难重重者纳入T和B细胞膜机能深入研究。在目前的深入研究之前，8名慢困难重重者(SP小组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身免疫反应阳性。所有的与会者都属于1型式哮喘困难重重的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身免疫反应对某些免疫反应的阳性反应会，然而，一名病患已经属于2期至少6年，但没有显现出临床研究腹泻，一名病患被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集科学深入研究取样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究之前对该NAD来进行了另行评量。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜忍术和T细胞膜诱发试验评量NAD之前Treg的Hz、特异性和机能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)来进行无监督聚类深入研究，评量Treg特异性。

结果：与身体健康NAD来得，来自慢困难重重体的潜意识CD4+T细胞膜的监督聚类看出，激活的潜意识CD4+ TregHz减小，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)暗示减小有关。一名HbA1c增大的病患与困难重重较快者和匹配的对照小组来得，Treg谱有所相异。机能计算出来结论，与身体健康NAD来得，来自较快困难重重体的Treg内皮细胞的CD4+振荡T细胞膜诱发值得注意受损。展示出为对振荡CD4+T细胞膜CD25和CD134暗示的诱发减小。

绘出1 有的系统的特异性深入研究看出，CD4+Treg亚型式在慢困难重重表头之前减小。由FlowSOM生成的Treg室，周围在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标有物暗示检验出10个元簇:潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用于9个相异Treg标有生成的10个元簇的MST。每个节点推选一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在节点小组周围上色。每个节点之前的饼绘出坚称单个标有的暗示层次。(b)每个元聚类的热绘出，以看出整体而言标有暗示。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)生成绘出，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说轻元素为每个metacluster箱内本站绘出(轻元素> 0.05%)未确定为HD和SP小组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞膜(l)。浅蓝色左上方推选捐赠者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 用于CITRUS的预测模型式证实，TregHz的减小是困难重重较快的标志。AO门控(a - f)和玉米深入研究(g-k)更为SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的推选性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示来进行分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑斑)和SP(虎纹)小组以及NADSP 606(浅蓝色)之前CD25+ cd127的Hz综合绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱内本站绘出;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突出的簇被辨认为SP和HD表头之间的相异。(j)箱内本站绘出看出了在SP(虎纹)和HD(灰点)小组之前，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的一般来说轻元素(数目)。(k)数据集看出每个簇的特异性(粉红色)和Treg标有一般来说暗示与背景暗示(浅蓝色);上列，磁盘Treg_3;前面悄悄，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇之前标有的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验

绘出3 与身体健康献血者来得，困难重重较快者潜意识treg的GITR减小。每个潜意识CD4+T细胞膜元簇(潜意识T细胞膜_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞膜;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个暗示标有的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的暗示热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR暗示串联，看出数据集(c)和综合绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和化验，p< 0.07(浅蓝色)所有NAD包括，p< 0.05(浅蓝色)NADSP 606和匹配的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR暗示，从AO门控，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，看出数据集(e)和综合绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩化验

绘出4 来自较快困难重重的CD4+ treg细胞膜控制振荡CD4+T细胞膜的潜能减低。SP小组用浅蓝色的本站和左上方坚称，HD小组用浅蓝色的本站和左上方坚称，浅蓝色的本站/左上方坚称NADsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标有为CFSE, Treg按推论的数目溶液。用抗CD3 /28微珠抑止细胞膜，人才培养3当晚来进行流式细胞膜忍术检测。(a-d)与CD4+反之亦然者一般来说应的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发%-。用于阳性对照(激活的响应细胞膜包含treg)计算诱发%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

绘出5 振荡CD4+T细胞膜对较快困难重重的T细胞膜抑止的诱发更敏感。SP小组用浅蓝色的本站和左上方坚称，HD小组用浅蓝色的本站和左上方坚称，浅蓝色的本站/左上方坚称NADsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标有，treg按推论的数目溶液。用抗CD3 /28微珠抑止细胞膜，人才培养3当晚来进行流式细胞膜忍术(CD25反染)和细胞膜因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发三份(b)。(c,d) CD25诱发三份(c)和CD134诱发三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养之前的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

论证：我们计算出来的论证是，来自较快困难重重子的抑止潜意识CD4+Treg在GITR暗示之前取得了延展和丰富，重申了大幅度深入研究Treg在1型式哮喘风险母体之前的异质性的有效性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28